ATCC細胞株一般使用蛋白水解酶(比如胰蛋白酶)消化貼壁細胞成單個細胞,也可加入乙二胺四乙酸(EDTA)提高消化能力,EDTA 是一種二價離子的螯合劑,能抑制細胞膜上的Ca2+和Mg2+。常用的細胞消化液一般含有0.25%(w/v)的胰酶和0.03% (w/v) EDTA,一般用不含Ca2+和Mg2+的鹽溶液配置,先用胰酶-EDTA 消化液清洗細胞(5.0 -10.0 ml/75cm),然后棄去消化液,重新加入少量的胰酶-EDTA 消化液(2.0 to 5.0 ml/75 sq. cm flask) ,觀察ATCC細胞株直到細胞變圓脫離瓶壁,此過程一般需要5-15分鐘,為了避免細胞成團,消化細胞的過程中不要拍打細胞瓶。對于特別難消化的細胞,可以加入胰酶EDTA 消化液后把細胞置于37°C 促進消化,ATCC細胞株脫離瓶壁后,立刻加入含有血清的*培養基中止消化,血清中某些蛋白質能夠抑制胰酶的活性。
ATCC細胞株是通過選擇法或克隆形成法從原代培養物或細胞系中獲得具有特殊性質或標志物的培養物稱為細胞株,也就是說,細胞株是用單細胞分離培養或通過篩選的方法,由單細胞增殖形成的細胞群。細胞株的特殊性質或標志必須在整個培養期間始終存在。
原代培養物經傳代成功后即為細胞系,由原先存在于原代培養物中的細胞世系所組成。如果不能繼續傳代,或傳代次數有限, 可稱為有限細胞系,如可以連續培養, 則稱為連續細胞系,培養50代以上并無限培養下去。 所以細胞株是通過選擇法或克隆形成法從原代培養物或細胞系中獲得的具有特殊性質或標志的培養細胞。從培養代數來講,可培養到40-50代。細胞株的特殊性質或標志必須在整個培養期間始終存在。對于人類腫瘤細胞,在體外培養半年以上,生長穩定,并連續傳代的即可稱為連續性株或系。
原代培養的細胞一般傳至10代左右就不容易傳下去了,細胞的生長就會出現停滯,大部分細胞衰老死亡。但是有極少數的細胞能夠度過“危機”而繼續傳下去,這些存活的細胞一般能夠傳到40--50代,這種傳代細胞叫做細胞株。細胞株的遺傳物質沒有發生改變。當細胞傳至50代以后又會出現“危機”,不能再傳下去。但是有部分細胞的遺傳物質發生了改變,并且帶有癌變的特點,有可能在培養條件下無限制地傳代下去,這種傳代細胞稱為細胞系。在一些別的資料中,細胞株和細胞系的概念與我們教材上的說法正好相反。課標教材沒有再介紹這一對概念。這又是為什么呢?人教社編輯包春瑩老師(bcying)對這一疑點的解釋:細胞系和細胞株,兩者曾一度混用,導致有些文獻中概念不清。下面所指的概念是現在國內外比較通用的,也是絕大多數研究者接受的觀點。
原代培養物經傳代成功即稱為細胞系(CellLine),因此細胞系可泛指一般可能傳代的細胞。其中能夠連續傳代的細胞叫做連續細胞系或無限細胞系,不能連續培養的稱為有限細胞系。大多數二倍體細胞為有限細胞系。通過選擇法或克隆形成法從原代培養物或細胞系中獲得具有特殊性質或標志物的培養物稱為細胞株(CellStrain),也就是說,細胞株是用單細胞分離培養或通過篩選的方法,由單細胞增殖形成的細胞群。細胞株的特殊性質或標志必須在整個培養期間始終存在。